Lietojot peptīdus, mēs bieži sastopamies ar peptīdu tīrības un peptīdu satura rādītājiem. Daudzi cilvēki var brīnīties, kāpēc viņu peptīdu tīrība ir 95%, bet peptīdu saturs ir tikai 80%. Tas ir tāpēc, ka tie ir divi pilnīgi atšķirīgi jēdzieni.
Peptīdu tīrība: Peptīda tīrība attiecas uz mērķa peptīda daudzumu, kas noteikts pie 214 nm (214 nm ir peptīdu ķēdes absorbcijas viļņa garums), izmantojot HPLC analīzi.
Peptīdu saturs: tas attiecas uz peptīdu procentuālo daudzumu attiecībā pret vielām, kas nav -peptīdu saturs paraugā.
Peptīda tīrība attiecas uz mērķa peptīda saturu, kas noteikts ar HPLC pie 214 nm (214 nm ir peptīdu ķēdes absorbcijas viļņa garums). Papildus mērķa peptīdam HPLC var noteikt piemaisījumus, tostarp: dzēstās sekvences (mērķa sekvencēm, kurās trūkst viena vai vairāku aminoskābju atlikumu), saīsinātas sekvences (sekvences, kas ģenerētas aizsardzības laikā) un nepilnīgi noņemtas sekvences (kas rodas sintēzes procesā vai galīgajā šķelšanās procesā). Tomēr HPLC nevar noteikt ūdeni un atlikušos sāļus, piemēram, trifluoracetātu (TFA) un acetātu. Peptīdu sintēzes laikā peptīdu sekvence tiek atdalīta no sveķiem, izmantojot TFA, un attīrīšanas laikā rodas arī neliels TFA daudzums. Tāpēc peptīda brīvais aminogals un citas sānu ķēdes, piemēram, Arg, Lys un His, var radīt nelielu daudzumu TFA piemaisījumu. Vēl viena problēma ir mitrums. Peptīdus parasti dehidrē, izmantojot liofilizāciju, taču pat tādā gadījumā ūdens pastāvēs dažādās pakāpēs atkarībā no kovalentās saistīšanās spējas. Tāpēc piegādātie peptīdi parasti satur TFA sāļus un nelielu daudzumu ūdens, ko nevar noteikt ar HPLC, tādējādi radot atšķirības peptīdu saturā un tīrībā.
