Sarežģīta un hidrofobiska peptīdu sintēze

Sarežģīta peptīdu sintēze|Hidrofobo peptīdu pielāgošana|Sarežģīta peptīdu sintēze|Klasteru secību sintēze|Zinātne{0}}Peptīds

Peptīdu secība ir pārāk hidrofoba? Vai viegli apkopot? Vairāki disulfīda saišu pāri? Zinātne-Peptīdu sarežģītās peptīdu sintēzes un hidrofobās peptīdu sintēzes pakalpojumi specializējas visa veida "nevar paveikt". 20 gadu pieredze, īpašas šķīdinātāju sistēmas, stabila piegāde. Lūdzu, sazinieties ar mums.

Kādi peptīdi tiek uzskatīti par "sarežģītiem"?
20 gadus darbojoties peptīdu sintēzes biznesā, esmu redzējis visādus sarežģītus peptīdus. Kad klienti ierodas pie mums, viņi jau ir jautājuši vairākiem uzņēmumiem, un viņi saņem atbildi vai nu "Es nevaru to izdarīt", vai "Izmēģiniet to, bez garantijas".

Peptīds ar spēcīgu hidrofobitāti: transmembrānas reģions, signālpeptīds, hidrofobā aminoskābe, sintezējot, tā salips kopā uz sveķiem, un aiz tā esošā aminoskābe nevarēs iekļūt.
Viegli agregējami peptīdi, piemēram, amiloīdi un pretmikrobu peptīdi, sintezējas kaudzēs un attīrīšanas laikā aizsprosto kolonnu.
Peptīdi ar vairākiem disulfīda saišu pāriem: vairāk nekā trīs pāri, viens nepareizs solis savienošanas secībā un visa molekula ir sabojāta.
Garš peptīds: vairāk nekā 60 aminoskābes, katrs ražas solis samazinās, un beigās nekas nepaliek.
Sarežģīta modifikāciju kombinācija: fosforilēšana, fluorescence, ciklizācija un apstākļi, kas cīnās savā starpā.
Mēs varam ņemt tos visus, un tas nav "pamēģināt", bet "izveidot plānu".

1. Hidrofobie peptīdi: ar specializētām šķīdinātāju sistēmām
Hidrofobo peptīdu grūtības slēpjas faktā, ka tos nevar izšķīdināt parastajos šķīdinātājos, un, sintezējot, peptīdu ķēde "saspiežas kopā" ​​uz sveķiem, padarot neiespējamu aiz tā esošo aminoskābju iekļūšanu.

Mūsu risinājums:
Īpaša šķīdinātāju kombinācija: DMF, NMP, DCM jaukta sistēma, kā arī nedaudz šķidruma atbrīvošanās līdzekļa, lai peptīdu ķēde būtu izstiepta.
Temperatūras optimizācija: dažas reakcijas ir labākas 40 grādu temperatūrā nekā istabas temperatūra, dažas ir jāsamazina līdz 0 grādiem, mēs tās esam izmēģinājuši pa vienam.
Sveķu izvēle: izmantojiet augstas šķīdības sveķus hidrofobiem peptīdiem, lai atstātu pietiekami daudz vietas peptīdu ķēdēm.
Izšķīdinātas etiķetes: ja nevarat, pievienojiet hidrofilu etiķeti un nogrieziet to pēc sintēzes.

Reāls gadījums: 35aa transmembrānu peptīds, hidrofobās aminoskābes veidoja 70%, klients meklēja trīs uzņēmumus nevar izdarīt. Mēs mainījām šķīdinātāju sistēmu un pievienojām šķīdināšanas etiķeti, beidzot tīrība bija 92%, un klients veica struktūras izpēti gludi.

2. Vairāki disulfīda saišu pāri: nav veiksmes, stratēģija
Jo vairāk ir disulfīda saites, jo grūtāk ir tās savienot pārī. Divi pāri ir labi, bet trīs vai vairāk pāri, un viens nepareizs solis, un viss.
Mūsu stratēģija:
Ortogonālā aizsardzība: Cys var atvērt un savienot pārī pakāpeniski, izmantojot dažādas aizsarggrupas, piemēram, Trt, Acm, tBu.
Oksidācijas apstākļu optimizācija: gaisa oksidēšana, glutationa oksidēšana, joda oksidēšana, dažādas metodes dažādiem peptīdiem.
Vidēja kvalitātes kontrole: pēc katra pāra paņemiet paraugu MS un apstipriniet savienošanu pārī, pirms turpināt.
MS/MS apstiprinājums (neobligāts): galīgā sadalīšana-ar sekundāro masas spektrometriju, lai redzētu, kur patiesībā ir pievienotas disulfīda saites.

A real case: A conotoxin peptide containing four pairs of disulfide bonds was rejected by many companies. We designed a four-step oxidation strategy, which took six weeks, and delivered >90% tīrība, pareizi savienotas disulfīda saites un kristāla struktūru pēc tam atrisināja klients.

3. Agregācija{1}}nodrošināti peptīdi: sintezējas aizsardzības laikā
Dažiem peptīdiem, piemēram, amiloīda proteīnam un antibakteriālajam peptīdam, dabiski patīk agregēties. Tie sāk agregēties, kad tiek sintezēti, bloķē kolonnu, kad tie tiek attīrīti, un nevar izšķīdināt, kad tie ir rokā.
Mūsu risinājums:
Pseidoprolīns: Pseidoprolīnu ievada Ser/Thr pozīcijā, lai izjauktu agregācijas tendenci un pēc sintēzes mainītos atpakaļ.
Segmentālā sintēze: pārāk polimerizētos peptīdus sagriež vairākos segmentos un sintezē atsevišķi, un beigās atkal savieno.
Attīrīšanas apstākļu optimizācija: augsta temperatūra, skābs pH, organisko šķīdinātāju pievienošana, lai atrastu apstākļus, kas padara to ne-polimerizējošu.

4. Sarežģītas modifikatoru kombinācijas: apstākļi bez cīņām
Dažiem peptīdiem ir vairākas prasības: fosforilēšana, fluorescējoša marķēšana un ciklizācija. Šīs modifikācijas var būt pretrunā viena ar otru, - piemēram, fosforilēšana ir skābes-fobiska, fluorescējošais marķējums ir gaismas-fobisks, un ciklizācijai ir nepieciešams noteikts pH līmenis.
Mūsu pieeja:
Saglabāšanas stratēģijas dizains: kura apgriešana jāveic vispirms, kura vēlāk, izstrādāta iepriekš.
Ortogonālie apstākļi: katra reakcijas posma apstākļi neietekmē jau veiktās modifikācijas.
Vidēja kvalitātes kontrole: pēc katra modifikācijas posma paņemiet paraugu, lai pārliecinātos, ka tas ir izdarīts pareizi, pirms turpināt.

5. Tīrība: atkarībā no tā, ko jūs ar to darāt

Katram peptīdam ir pievienots HPLC un MS ziņojums, padarot tīrības datus caurspīdīgus.

1. Mēs to darām 20 gadus
Sarežģīta peptīdu sintēze nav kaut kas tāds, ko var paveikt ikviens. Gadu gaitā esam strādājuši ar daudziem sarežģītiem peptīdiem: transmembrānu proteīniem, vīrusu saplūsmes peptīdiem, konotoksīniem, amiloīdiem proteīniem, pretmikrobu peptīdiem utt. Mums ir laba ideja par to, kuras sekvences ir pakļautas problēmām un kādos apstākļos tās var saglabāt. Vismaz jums nav jāizmēģina katrs no tiem, ja nākat pie mums sarežģītās un hidrofobās peptīdu sintēzes dēļ.

2. Tas nav "izmēģini", tas ir "ir programma".
Daudzi uzņēmumi uzņemas sarežģītus peptīdus un saka: "Mēs to izmēģināsim, bet mēs to negarantējam". Mēs tā nespēlējam. Pirms pasūtījuma pieņemšanas izvērtēsim secību, kāds ir hidrofobo aminoskābju īpatsvars, vai ir zināma agregācijas tendence, cik disulfīda saišu pāru un vai modifikācija ir sarežģīta vai nē. Pēc novērtēšanas mēs jums pateiksim: kāds ir panākumu līmenis un cik ilgs ir cikla laiks.

Mēs nepieņemam pasūtījumus, kurus nevar izdarīt, un mums ir jānodod pasūtījumi, kurus esam pieņēmuši.

3. Specializētas šķīdinātāju sistēmas hidrofobitātei
Hidrofobais peptīds ir mūsu stiprā puse. Ja parasto šķīdinātāju nevar izšķīdināt, mēs mainīsim šķīdinātāju; ja parastā temperatūra nereaģē, mēs regulēsim temperatūru; ja parastie sveķi neiztur, mēs nomainīsim sveķus. Ir arī šķīdinātāja etiķete kā atpakaļejoša izeja.

4. Vairāki disulfīda saišu pāri, soli-pa-
Ja ir vairāk nekā trīs disulfīda saišu pāri, mēs veiksim soli{0}}pa-pieeju: pirmais solis ir aizsargāt A un atvērt pirmo pāri; aizsargāt B un atvērt otro pāri; aizsargāt C un atvērt trešo pāri. Pēc katras darbības mēs ņemam paraugus MS un apstiprinām savienošanu pārī pirms došanās tālāk. Visbeidzot, MS/MS tiks bojāts un pārbaudīts, un dati tiks sniegti jums bez minējumiem.

5. Kvalitātes kontrole: dati katrā solī
Sarežģītu peptīdu kvalitātes kontrolei jābūt uzmanīgākai:
Starpposma kvalitātes kontrole: pēc katra fragmenta un katra modifikācijas posma vispirms izmēra tīrību un molekulmasu.
Galaprodukts: HPLC tīrībai, MS molekulmasai.
Šķīdības tests: Nodrošiniet ieteicamos šķīdinātājus un šķīdināšanas metodes, lai jūs nesaņemtu peptīdus, kas nešķīst.
Veicot sarežģītu un hidrofobisku peptīdu sintēzi, dati runā paši par sevi, katrs solis ir izsekojams.

• Piegādes veids: liofilizēts pulveris, centrifūgas mēģenes vai flakoni.
• Pavaddokumenti: COA (HPLC profils + MS spektrs), sintēzes ziņojums (pēc izvēles).
• Izvēles testi: peptīdu saturs, endotoksīns, mitrums, aminoskābju sastāvs, šķīdības tests.
• Pielāgots iepakojums: sadalīšana un marķēšana atbilstoši jūsu prasībām.
• Katrs sarežģīts un hidrofobās peptīdu sintēzes produkts pirms izsūtīšanas tiek pārskatīts, lai pārliecinātos, ka secība ir pareiza un tīrība atbilst standartam.

Neatkarīgi no tā, vai citi jūs ir atraidījuši vai nevarat to izdarīt savā laboratorijā, varat runāt ar mums. Ja meklējat zinātnes{1}}peptīdu, lai veiktu sarežģītu un hidrofobisku peptīdu sintēzi, jums vismaz nav jāmēģina pa vienam.

Man vajag, lai tu man pateiktu:
Peptīdu secība (vai mērķa informācija)
Vai jums kāds cits to ir darījis iepriekš? Kāds ir rezultāts?
Cik daudz (miligramos)
tīrības prasības

Kad tu to vēlies?

Sniegsim priekšizpēti un programmas piedāvājumu 24 stundu laikā.